腦康膠囊定性定量分析
來源：中大網(wǎng)校發(fā)布時(shí)間：2012-12-28
摘要：目的對(duì)腦康膠囊中丹參、川芎、葛根進(jìn)行薄層色譜定性鑒別，并測(cè)定腦康膠囊中葛根素的含量。方法采用薄層色譜法（TLC）對(duì)上述3味藥材進(jìn)行鑒別，展開劑分別為苯醋酸乙酯（19：1）、正己烷醋酸乙酯（9：1）、氯仿甲醇水（78：35：10）的下層液；采用反相高效液相色譜法測(cè)定葛根素的含量，DiamonsilC18色譜柱（5μm，150mm×4.6mm），以甲醇0.015%磷酸溶液（23：77）為流動(dòng)相，流速為1.2ml/min，柱溫35℃，檢測(cè)波長(zhǎng)249nm，測(cè)定。結(jié)果HPLC測(cè)定的線性范圍為0.02～0.12μg，相關(guān)系數(shù)r=0.9999；膠囊中葛根素的平均回收率為98.53%，RSD=1.08%，n=6；精密度（RSD＜2%）良好。結(jié)論該法操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，適用于腦康膠囊中主要藥材的定性鑒別和葛根素的含量測(cè)定。
關(guān)鍵詞：葛根素；腦康膠囊；薄層色譜法；高效液相色譜法
腦康膠囊系由葛根、川芎、丹參等藥材組成的中藥復(fù)方制劑，具有補(bǔ)益肝腎、填精補(bǔ)髓、活血通脈的功效。主要用于治療腦動(dòng)脈硬化癥肝腎精虧兼瘀血阻絡(luò)證，癥見頭暈頭痛，神疲健忘，胸悶或痛，口干目澀，腰膝酸軟，虛煩少寐等。為了控制本品的質(zhì)量，筆者采用TLC法對(duì)制劑中所含的川芎、丹參、葛根等3味藥材進(jìn)行了薄層色譜鑒別實(shí)驗(yàn)，并采用HPLC法測(cè)定本品中葛根素的含量。經(jīng)方法學(xué)研究表明，該方法具有簡(jiǎn)便易行、結(jié)果可靠、靈敏度高、重現(xiàn)性好、專屬性強(qiáng)等特點(diǎn)，可作為腦康膠囊質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。
1儀器與試藥
美國(guó)Waters高效液相色譜儀（2690溶劑輸送系統(tǒng)，996二極管陣列檢測(cè)器，自動(dòng)進(jìn)樣器，Millenium32數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)）：葛根素、丹參酮ⅡA、川芎對(duì)照藥材（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供）；腦康膠囊和各種陰性膠囊由成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥藥劑學(xué)教研室提供（批號(hào)為：040902，040906，040910）；硅膠G（薄層層析用，青島海洋化工廠）：甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其它試劑均為分析純。
2方法
2.1TLC鑒別實(shí)驗(yàn)
2.1.1丹參的鑒別取本品內(nèi)容物5g，加乙醚30ml，置水浴中加熱回流1h.濾過，濾液揮干，殘?jiān)右掖?.5ml使溶解，作為供試品溶液。同法取缺丹參的陰性樣品制成陰性對(duì)照品溶液，另取丹參酮ⅡA對(duì)照品，加乙醇制成每毫升含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)。吸取上述3種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯醋酸乙酯（19：1）為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與丹參酮ⅡA對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的暗紅斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品無此斑點(diǎn)。見圖1.
2.1.2川芎的鑒別取本品內(nèi)容物5g，加乙醚20ml，置水浴上加熱回流1h，濾過，濾液揮干，殘?jiān)哟姿嵋阴?ml使溶解，作為供試品溶液。同法取缺川芎的陰性樣品制成陰性對(duì)照品溶液。另取川芎對(duì)照藥材1g同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷醋酸乙酯（9：1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品無此斑點(diǎn)。見圖2.
2.1.3葛根的鑒別取樣品5g，置索氏提取器中，加乙醚30ml置50℃水浴上回流提取2h，棄去乙醚液；殘?jiān)?0ml甲醇回流提取4h，提取液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加水飽和的正丁醇液萃取兩次，20ml/次，合并正丁醇液，濃縮至干，殘?jiān)蛹状?ml溶解，加于已處理好的聚酰胺柱（內(nèi)徑1.5cm，填充高度約15cm）上，用水80ml洗脫，收集水洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml溶解，作為供試品溶液。同法缺葛根的陰性樣品制成陰性對(duì)照品溶液。另取葛根素對(duì)照品，加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)。吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿甲醇水（78：35：10）的下層液（15℃以下放置過夜）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的淡藍(lán)色熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾。
2.2含量測(cè)定
2.2.1色譜條件色譜柱DiamonsilC18（5μm，150mm×4.6mm）；流動(dòng)相甲醇0.015%磷酸溶液（23：77）；流速1.2ml/min；柱溫35℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為249nm；靈敏度0.001AUFS.在選定條件下，葛根素和樣品中其它分色譜峰可基線分離，葛根素與其相鄰色譜峰的分離度大于1.50；按葛根素峰計(jì)算，理論板數(shù)（N）為3000以上，拖尾因子（T）為1.03.
2.2.2測(cè)定方法供試品溶液的制備：取本品內(nèi)容物適量，研勻，取0.5g，精密稱定，置平底燒瓶中，加甲醇50ml，稱定重量，置水浴上回流45min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。陰性樣品溶液的制備：取腦康陰性膠囊（缺葛根）內(nèi)容物適量，研勻，取0.5g，精密稱定，置平底燒瓶中，加甲醇50ml，稱定重量，置水浴上回流45min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。對(duì)照品溶液的制備：精密稱取葛根素對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升含10mg的溶液。測(cè)定：分別精密吸取對(duì)照品、供試品和陰性樣品溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄峰面積，根據(jù)葛根素對(duì)照品的峰面積，計(jì)算出樣品的含量。
2.2.3測(cè)定結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密量取葛根素對(duì)照品溶液（10μg/ml）2.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0μl進(jìn)樣，記錄色譜圖，測(cè)定其峰面積，并以峰面積值（A）對(duì)進(jìn)樣量（C）進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：C=2.5914×107A＋1.9359×103，r=0.9999.結(jié)果表明，葛根素在0.02～0.12μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。精密度實(shí)驗(yàn)：精密吸取上述對(duì)照品溶液5μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，葛根素峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）＜2%，結(jié)果表明，精密度良好。穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：取樣品供試液分別于0，2，4，8，12h進(jìn)樣10μl，測(cè)得樣品中葛根素峰面積值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜2%，結(jié)果表明，樣品供試液在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)：按擬定的含量測(cè)定方法，取同一批樣品五份，分別制備樣品供試液，測(cè)得峰面積值及含量，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜2%，結(jié)果表明，重復(fù)性好�；厥章蕦�(shí)驗(yàn)：取6份已知含量的樣品約0.2g，分別加入葛根素對(duì)照品溶液（10mg/ml）75，150，225μl照含量測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定，結(jié)果，3種水平6次實(shí)驗(yàn)的加樣回收率測(cè)定結(jié)果均在95%～105%之間，其平均值為98.53%，RSD為1.08%.
